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如何选择合适的western Blot成像方法

如何选择合适的western Blot成像方法

最合适的Western blot实验方法取决于您期望获得哪些信息,以下内容将帮助您选择最佳实验方法。

化学发光方法

化学发光western blot是相对容易且灵敏度极高的检测方法,灵敏度可以达到fg级。

分子量差异显著的蛋白,通过电泳可轻松分离,使用“化学发光”检测非常方便。

优势:
劣势:

灵敏度高

容易,实验方案熟悉

兼容胶片和数字成像

半定量分析

酶促反应

仅能进行单一信号采集,上样量控制需要剥离和二次孵育


化学发光,单信号,单蛋白

Chemiluminescence. One signal. One protein

蛋白凝胶电泳:

检测单一蛋白

确定蛋白有无

检测抗体反应

蛋白纯度分析

检测低丰度蛋白

荧光方法

荧光Western blot使用荧光染料标记的二抗进行检测,印迹膜上的靶标蛋白浓度与荧光信号强度呈线性关系,实现真实可靠的定量分析。荧光染料发射光谱不同,因此在一张 印迹膜上可实现多重检测。在无需剥离和二次孵育条件下,进行上样量质控,分析翻译后修饰蛋白时尤为适用。

荧光western blot使用 红外或者可见荧光染料.

优势:
劣势:

可进行多重检测

定量精准度高

荧光近红外印迹膜可储存,并可重复成像

灵敏度略低于化学发光方法

膜自发荧光导致背景噪音增加


可见荧光检测的优势

当需要同时检测三个蛋白时,可见荧光显然是最佳的选择。可见荧光具备很好的灵活性,有多种可见荧光染料可供选择。如果您正在使用可见荧光染料(发射光谱可被区分)进行 其它实验,很容易将这些染料应用于Western blot实验中。

多重荧光,多种蛋白

Multiplex Fluorescence. Multiple Proteins

荧光检测方法,可用于:

同时检测多种蛋白

研究翻译后修饰蛋白

同一印迹膜的上样量质控

多个泳道归一化

精确定量 Western实验